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ラボ復帰

長い間日本に里帰りでしたが、やっとNYへ戻ってきました。
とっても快適。蒸し風呂状態の愛知県とは雲泥の差。

ということで、楽しみにしていたKOパラサイトたちは生きているということです。
これからクローンしてジェノタイピングです。

あとはこないだMSでみつけた遺伝子をこんどは切れ端拾ってベクターにいれてE.coliで発現させねずみにいれて抗体作ってブツをIFA。

今日はジェノタイピング用のプライマたちを注文と、cDNA用のパラサイト解凍と、クローン用のホスト細胞準備。
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5’RACE

5’RACEの結果、2つの遺伝子は2つ。
Bridgeもでなかったし、5’あだぷたも近くにあったし。
けっきょくUTRがわかるだけだった。
まあ、ヒストン修飾からしてそれっぽかったんだけどね。

頼んでおいたKOのコンストラクトが来たんでKOしようね。
かなり面白くなってきた。

RACE!

むむむ、

2個の遺伝子なのだが、実は1個かもしれない可能性。
普通はRLM-RACEすると思うのだけど、問題は5’の遺伝子が12kb。
cDNA作るときにreverse transcriptaseがキャップから3’の遺伝子まで
ちゃんとできないだろうなと。そうすると5’アダプターと3’の遺伝子特有プライマーでPCRしたら
当然なにも出ないだろうに。

とすると、普通にcDNAつくって5’遺伝子のしっぽの方のプライマーと3’の頭の方のプライマーで
やるしかないのかな?または、そのプライマーたちでRTするか。

でもRACEして短いのがでたら遺伝子は2個ってことが証明できるか。一応RACEもするかな。

むむむ?

まじですか?

5階はエレベーターのところが改装中です。

先ほどペンキ塗りの人が仕事を終わってカバーされているビニールをとりました。

むらさきのドアとピンクの壁ですか?

まじですか?

Mucin

釣り上げたたんぱく質、
??Domainが13個も入っていてすごく不思議。
普通は1個か2個だけなのにね。

むむむ、
なんでMucinっぽいDomainがはいってるわけ?
TTTTTTTばっかじゃん。
GPI-Anchorもあるし。

シュガーから逃げたかったので標的3を変更して免疫にしたのに。

結局お砂糖にもどってくるのか、、、

どれだけ逃げようとしても気がつくとまた出会ってしまう。
これを通してお砂糖勉強しましょうということなのかも。

Qualまであとすこし、がんばろう!

手作業

中国人のおばちゃん
さすがに手作業で
リバースプライマーやると
一文字エラーでした。

注文しなおしです。
涙涙。

だんだん近づいてくるのだよ!

解凍したハイブリドーマ
そろそろ育ってきているので
日曜出勤でクローン。
やることありすぎ。

Qualが近くなってきて
こんなことやってる場合じゃないのだが、
ボスにプッシュされたのだからしょうがない。

今日は顕微鏡にしがみついて、
明日から図書館でゴリゴリ読みまくるしかない!

分類

ハイブリドーマたち、分類すると

バンドなし
サーモンの仲間
70K

の三種類しかないのか。
あとはよく分からない弱いやつらを
つつくしかないのかい。

結局大物は、、、

Mass Specで大物飛ばしたら
結局はヤンセンがIDしたやつと同じじゃん。

ちょっとがっかり。

じゃあ、blind cutしたバンドたち、
なにか釣れるといいんだけど。

まだ釣りはつづく。

ピッキング

生えてきた抗体を作るハイブリドーマたちをソフトアガのプレートからほそーいガラス管で吸う作業なのだが、顕微鏡をのぞきながら数時間やるので酔うのです。きもちわるいです。顕微鏡酔い。

大物

つれたんだけどね、

大物過ぎよ。

Resolving gelに入らないぐらいのMolecular Weightじゃん。

なんだこれ?

はう、もう2週間切ったか。

気合をいれて書くか。

lysateたくさん収穫したのでサーモンの抗体で釣るよてい。

ちゃんとバンドでてよ!おねがい!

消える

immunoblotをたくさんやらなかんようになったので
いっぺんに10ジェル走らせるチェンバーを使うようにとのこと。
かなりでかい。ボス曰く「これならすぐにできるだろう」
すごいよ!

あ、

でもこれトランスファーにはつかえないの?
意味ないじゃん。

涙。

ちまちまやるしかないのか。

Fishing expedition 2.0

Oh God!
My fishing expedition started again!

Work in Progress! 無事に終了。

いやいや、無事に終了。
人前に立つとすごく緊張する性格なので
事前に何度も練習したのだが、
やはり紙を読みながらやらないと頭が真っ白になってしまうようなので
スクリプト見つつ、ジョークを交えながら。

"I was so nervous last night that I couldn't sleep at all. If I fall asleep, please wake me up."

しらけると思ったけど、かなりウケられたようで、、、不思議。
あと、Hybridomaの名前がみんなお魚さんなのも理由をいうとまたまたウケたようで、
いつも厳しいモッシも"I really enjoyed your humor."とのこと。

結果にすればあっけないスライド一枚なのだが、
これが数ヶ月の汗と涙の結晶なんです。

まあまあ建設的な質問がちらほら来て終了。

Pull downしてMSに送ったサンプルは全部IgGペプタイド(はずればっか)だったので
データ的には寂しいWIPになったような、、、。

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